TIPOS DE CROMATOGRAFIA

Actualmente los métodos cromatrograficos han demostrado tener una aplicación muy amplia en la separación, purificación e identificación de sustancias ya sea orgánicas e inorgánicas así como sustancias biológicas de alto peso molecular.

Una de las particularidades de las técnicas cromatograficas, es que es más práctica en comparación de otras mucho más costosas y complicadas. Los resultados más relevantes se han alcanzado en el campo de los pigmentos vegetales y productos naturales, pero hoy día la cromatografía es de empleo cotidiano en todos los laboratorios e industrias a nivel mundial para logra separaciones elegantes y prácticas de mezclas.

CROMATOGRAFIA

Es un método fisicoquímico de separación de los componentes de una mezcla. Se basa en la diferente velocidad con que se mueven cada uno de los componentes a través de una fase estacionaria o inmóvil, transportados por un disolvente o fase móvil, dicho de otra forma, la separación de los compuestos se logra por dos fases que intervienen por lo que el fundamento se basa en el principio de distribución de fases.

Los métodos cromatrograficos se clasifican de acuerdo a:

  • La naturaleza de la fase estacionaria
  • La naturaleza de la fase móvil

TIPOS DE CROMATOGRAFIA

    •   Cromatografía de papel

    Como su nombre lo indica la separación se realiza sobre tiras u hojas de papel filtro. El principio de esta separación está basado en un reparto liquido-liquido. Es cromatografía L-L porque la fase estacionaria es el agua contenida en la celulosa del papel. Cuando la fase móvil (solvente orgánico) pasa sobre la fase estacionaria, el compuesto problema se reparte entre ambas fases.

Ventajas:

  • Es barata (se ocupa papel filtro)
  • Útil para sustancias muy polares
  • Es una técnica eficaz para separar pequeñas cantidades de material soluble en agua

Desventajas

  • Los cromatogramas son lentos (algunos requieren de 16 a 24 horas)

Técnicas

  • Cuando la inmigración es hacia abajo: hay un revelado descendente
  • Cuando el movimiento de la fase móvil es hacia arriba: revelado ascendente
  • Cuando es hacia afuera partiendo de un punto central: circular

RF

Es una constante característica de cada compuesto, siempre y cuando la determinación se efectúe bajo las mismas condiciones. El RF se define como la distancia recorrida por un compuesto desde su origen hasta su porción final, dividida entre la distancia recorrida por el eluyente desde el origen de la mezcla hasta la altura máxima alcanzada por el frente de dicho solvente.

  •  Cromatografía en capa fina

A pesar que la cromatografía sobe papel es muy versátil, y que sus métodos se emplean con mucha frecuencia en todos los campos de la Biología y la Química; el uso de celulosa como fase estacionaria para las separaciones, representa para ella una gran limitación técnica.

Por ser el papel insatisfactorio para todas las separaciones se vio en necesidad de buscar otras maneras de emplear los adsorbentes, así después de varios ensayos se desarrolló y adopto mundialmente la técnica de la cromatografía en capa delgada. Esta técnica consiste en la fabricación de capas finas de adsorbentes sobre placas de vidrio; estas capas se denominan cromatoplacas o simplemente placas.

Preparación de las placas

El primer paso es hacer una papilla de adsorbentes (usualmente con agua) y luego se aplica sobre el soporte rígido. Los soportes originales, y aun los más usuales son las placas de vidrio las cuales deben estar bien lavadas con agua y detergente y muy bien secadas. Si se van a utilizar posteriormente, se conservan en una solución fuertemente concentrada de carbonato sódico. La papilla es esparcida sobre la placa procurando que la capa a formar sea uniforme.

Bosquejo general del método

Los pasos generales son los siguientes:

  • Preparación de la placa cromatografica que incluye la preparación de la papilla, el extendido de la misma sobre un soporte rígido (inerte) , el secado y activado (por calentamiento)
  • Aplicación de la muestra
  • Desarrollo del cromatograma
  • Localización e identificación de la sustancia separada

La fase móvil: selección del disolvente

La selección dependerá de la naturaleza del compuesto que se va separar y del material en que la separación va a llevarse a cabo. Una regla general es comparar la polaridad de este con la sustancia que se desea separar. Si un disolvente puro no realiza bien la separación, se ensayan mezclas de disolventes.

    •   Cromatografía en columna

Dentro de esta categoría se agrupan los principales métodos de cromatografía donde se utiliza una columna empacada con algún solido (fase estacionaria o soporte de la misma) a través de la cual pasa un líquido (fase móvil) .Los métodos se agrupan de acuerdo a los sistemas físicos involucrados, pero lo común en ellos es lo práctico de la técnica empleada.

Las separaciones pueden realizarse por reparto, si el sólido implicado actúa como soporte para la fase estacionaria; por adsorción o intercambio iónico, si la fase estacionaria es el mismo sólido.

La cromatografía de gel, aunque es un  principio de separación muy distinto a los de adsorción, o de reparto, emplea los mismos métodos de la cromatografía en columna por lo que se le puede ubicar dentro de esta.

Bosquejo general del método

Dentro de una columna (de material y  dimensiones escogidas) se empaca un sólido (seco o en papilla) que será la fase estacionaria o el soporte para la misma, cubriéndolo con un solvente (fase móvil). Una pequeña cantidad de muestra se coloca en la parte superior del empacado; cuando el solvente fluye a través de la columna, se produce la separación de los diferentes componentes de la muestra de acuerdo a los diferentes principios de los distintos tipos de cromatografía. Las fuerzas que actúan en la separación en columna pueden ser fuerzas de Vander Waals o fuerzas electroestáticas.

Técnica de separación

Las técnicas más utilizadas son:

  • Elución simple
  • Elución fraccionada
  • Gradiente de elución

Localización y revelado

Los procedimientos empleados para revelar las placas son análogos a los utilizados en la cromatografía en papel. La aplicación de los reactivos se hace por rociado no por baño, ya que las placas se estropean fácilmente. El revelado se puede llevar a cabo con agentes corrosivos, como los ácidos concentrados y compuestos fuertemente oxidantes, cuando se trata de compuestos orgánicos.

Otro reactivo de localización es el yodo. La placa es expuesta a los vapores de yodo en un recipiente cerrado, que contiene unos pocos cristales de yodo, por un corto tiempo. El yodo tiene a concentrarse en los sitios donde están los compuestos, por lo que aparece una coloración violeta con los compuestos insaturados y una coloración marrón o café con las sustancias saturadas (en caso de compuestos orgánicos) dichas coloraciones desaparecen rápidamente al exponer la placa a la atmosfera. A pesar de no ser un buen agente revelador, tiene la ventaja de que muchas sustancias no reaccionan químicamente con él. Otros métodos que no afectan a los productos del revelado son la fluorescencia y la radiactividad, muchas placas llevan sustancias fluorescentes como aparición de manchas no fluorescentes. Además muchas veces los compuestos a separar adsorben la luz ultravioleta apareciendo como manchas fluorescentes de diferente color al del medio.

Identificación y valores de RF

La identificación de las sustancias separadas en capa fina es mejor llevarla a cabo por medio de agentes químicos de revelado y por reducciones de coloración. Los valores de RF son un poco menos valiosos en cromatografía en capa fina de lo que son en cromatografía de papel, porque existen factores adicionales variables que influyen en el proceso cromatografico:

  • La naturaleza del adsorbente
  • El disolvente
  • La actividad del adsorbente
  • El espesor de la capa
  • La temperatura
  • El equilibrio dentro de la cámara cromatografica
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Publicado el 15 mayo, 2011 en quimica y etiquetado en , , , , , , , , , . Guarda el enlace permanente. Deja un comentario.

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